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SD大鼠乳鼠心脏微血管内皮细胞原代分离培养方法

发布日期:2022-11-09 浏览次数:115

1.将新生24h的SD大鼠用75%乙醇浸泡5min,开胸,取出心脏后于含有双抗的预冷过的D-HANKS中漂洗两遍,移入超净台。

2.仔细剪除大血管,左右心房及右心室和室间隔,保留左心室,去除内、外膜,PBS清洗。

3.用眼科剪将心室肌剪碎至约1mm3,滴加1ml胎牛血清,均匀接种于6cm细胞培养皿内,组织块间隔1-2mm,放入5% CO2,37℃恒温培养箱内培养。

4.4小时后去除培养皿,加入3ml含有20%FBS和1%双抗的H-DMEM培养基,继续培养。

5.一般情况下48小时后可见有细胞爬出,换新鲜培养基继续培养。

6.5-7天后有大量细胞铺满皿底,弃去培养基,用PBS清洗一遍,加入2ml胰酶进行消化1分钟左右。

7.吸去胰酶。加入完全培养基终止反应,并用移液器反复吹打。

8.倾斜培养皿稍等片刻,让组织块沉淀后吸去上层细胞悬液,70μm细胞筛过滤后接种至12孔板为后续共培养试验做准备。