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双荧光素酶报告基因检测

发布日期:2022-11-11 浏览次数:138

荧光素(Luciferase)是自然界中能够产生生物发光的酶的统称,其中萤火虫荧光素 F-Luciferase 和海肾荧光素 R-Luciferase 最具有代表性。

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目前,双荧光素酶通常是指萤火虫荧光素酶和海肾荧光素。
这两种酶的主要区别:
1. 物种来源不同;
2. 它们的底物和辅因子不同;
3. 发光的颜色不同。
萤火虫萤光素酶是一种胞内蛋白,从甲虫(Photinus pyralis)中分离得到,大小为61KDa。在氧气、ATP和镁离子同时存在的条件下,催化底物萤火虫萤光素氧化,生成氧化萤光素,并发出黄绿色光,其最强发光波长为560nm。
海肾萤光素酶也是一种胞内蛋白,从海肾(Renilla reniformis)中分离,大小为36KDa。只需要氧气就可以催化腔肠素,氧化生成高能产物coelenteramide,并发出蓝光,其最强发光波长为465nm。
因此,正是由于这两种酶的底物和发光颜色不同,所以在双报告实验中得到广泛应用。研究者利用荧光素酶开发出一套极其灵敏且使用方便的基因报告系统。

双荧光素酶报告基因检测优势
单报告基因实验往往会受到各种实验条件的影响,而双报告基因则通过共转染的“对照"作为内参为试验提供一基准线,从而可以避免细胞活性和转染效率等外在因素对实验的影响,使得数据结果更为可信。双荧光素酶报告基因检测常用的载体有两种策略。第一种是两种荧光素分别位于两个载体上,第二种是两种荧光素酶位于同一个载体上。
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目前,这一系统被广泛用于转录因子结合位点与启动子活性分析、RNA 降解、信号转导、药物筛选、动物活体成像等领域。pGL3-Basic 质粒用于转录因子结合位点与启动子活性分析;psiCHECK2 质粒用于 miRNA 与其靶点相关分析。