分子生物学实验
CUT&Tag技术 RNA结合蛋白免疫沉淀（RIP） ChIRP GST pull-down实验 DNA pull-down实验 RNA pull-down实验 ChIP-Seq 凝胶迁移实验 染色质免疫共沉淀技术 免疫共沉淀检测 外泌体分离与检测 ELISA检测 Western Blot 原位杂交 双荧光素酶检测RNA pull-down实验
RNA pull down是体外研究RNA与蛋白互作的重要技术。该技术是用生物素标记体外转录的靶RNA分子，再用链霉亲和素纯化出与靶RNA结合的蛋白复合体，洗脱得到RNA结合蛋白质。再通过western blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与靶RNA结合；或通过质谱仪检测可以筛选出与靶RNA结合的蛋白。
生物素与链霉亲和素间的作用是目前已知强度最高的非共价作用；其中活化生物素可以在蛋白质交联剂的介导下，与已知的几乎所有生物大分子偶联。因此用生物素标记核酸后，可以纯化出与该核酸结合的各种生物大分子复合物。
实验流程
1.探针设计及标记：体外转录或合成获取RNA，生物素标记;
2.pull-down：与细胞裂解液孵育，形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素磁珠结合，从而把靶RNA结合蛋白从细胞裂解液中分离出来，经过洗涤将非特异性结合蛋白质去除；最后，洗脱得到与靶RNA结合的蛋白质复合物；
3.互作蛋白质鉴定：再经过Western Blot或质谱(MS)鉴定蛋白质。
体外转录或合成RNA，生物素标记；
细胞培养与细胞裂解液制备；
pull-down捕获互作蛋白；
Western blot验证；
MS鉴定可能的互作蛋白。
