DNA pull-down实验
DNA pull-down实验原理

DNA pull-down体外研究DNA与蛋白互作的有力工具。该技术将生物素标记的DNA片段结合在链霉亲和素磁珠上,再与细胞核蛋白孵育,纯化出与DNA片段互作的蛋白,洗涤洗脱得到的蛋白产物,做Western-blot检测特定蛋白是否与靶DNA片段结合;做质谱鉴定即可筛选出与DNA片段可能互作的蛋白信息(如:转录因子、组蛋白等)。

生物素与链霉亲和素间的作用是目前已知强度最高的非共价作用;其中活化生物素可以在蛋白质交联剂的介导下,与已知的几乎所有生物大分子偶联。因此用生物素标记核酸后,可以纯化出与该核酸结合的各种生物大分子复合物。


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实验流程
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  1. 探针设计及标记:针对靶标区域设计特异性DNA探针,探针经过脱硫生物素标记,跟偶联在磁珠上的链霉亲和素结合;

  2. pull-down:细胞核提取物与磁珠-DNA探针孵育,靶DNA可以和DNA探针特异性结合,纯化出与靶DNA片段结合的蛋白复合体,经过洗涤可以将非特异性结合蛋白质去除;最后,洗脱得到与靶DNA结合的蛋白质复合物;

  3. 互作蛋白质鉴定:再经过Western Blot或质谱(MS)鉴定蛋白质。



技术服务内容


  1. DNA探针的设计与合成;

  2. 细胞培养与核蛋白提取;

  3. pull-down捕获互作蛋白;

  4. Western blot验证;

  5. MS鉴定可能的互作蛋白。



交付结果


  1. 提供完整的实验报告;

  2. 客观公正的原始数据和实验结果分析。